你對(duì)熒光定量PCR了解了多少

 　　提到PCR，相信在實(shí)驗(yàn)室待過的同學(xué)并不會(huì)很陌生，這個(gè)由美國科學(xué)家Mullis在1985年發(fā)明的聚合酶鏈反應(yīng)，至今在世界范圍內(nèi)都有廣泛的應(yīng)用，作為生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重要的方法，其有著不可估量的作用。
　　什么是熒光定量PCR
　　我們知道，DNA有著雙螺旋結(jié)構(gòu)，當(dāng)溫度達(dá)到95攝氏度時(shí)，雙鏈的DNA會(huì)分解成為單鏈狀態(tài)，而在溫度到達(dá)72攝氏度左右時(shí)，DNA聚合酶會(huì)沿著磷酸到五碳糖的方向進(jìn)行合成。聚合酶鏈反應(yīng)PCR就是通過不斷地調(diào)節(jié)溫度，以數(shù)量級(jí)的速度增加DNA數(shù)量的方法。
　　而實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。
　　實(shí)時(shí)熒光定量常用的熒光化學(xué)分類有染料法和探針法。其中，探針法可以更加地對(duì)需要檢測(cè)的DNA片段進(jìn)行染色，一般情況下，探針法的特異性更高。
　　熒光定量PCR的價(jià)值
　　事實(shí)上，大多數(shù)病毒在感染動(dòng)物以后，會(huì)在感染后的7天左右產(chǎn)生特異性抗體。此后，當(dāng)同種病毒再次入侵時(shí)，機(jī)體會(huì)迅速的產(chǎn)生高水平抗體，以中和這些病毒。這個(gè)過程被稱為機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)。
　　依照生物體的這個(gè)特點(diǎn)，一般情況下，科學(xué)家會(huì)采用PCR或酶標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。但也有意外，比如目前國內(nèi)較為流行且對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成慘重?fù)p失的“非洲豬瘟病毒”，該病毒的自然宿主只有家豬，野豬，鈍緣軟蜱，但除豬只本身之外，人、車、物、料、等環(huán)境中攜帶有非洲豬瘟病毒都會(huì)造成非洲豬瘟的傳播，進(jìn)而威脅到豬群的安危。
　　更為可怕的是，這種病毒侵入豬只體內(nèi)后，豬只在產(chǎn)生抗體之前就會(huì)走向死亡，死亡率高達(dá)90%~100%，自2018年非洲豬瘟進(jìn)入中國以來，將近一年時(shí)間，對(duì)我國畜牧業(yè)造成了上百億的損失。此時(shí)，由于酶標(biāo)法檢測(cè)的是動(dòng)物產(chǎn)生抗體后的感染情況，顯然，對(duì)待這種烈性病毒來言，其價(jià)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。
　　熒光定量PCR有著高靈敏性、高度、方便省時(shí)等特點(diǎn)，他可以在短時(shí)間內(nèi)，將一個(gè)微量的特種DNA擴(kuò)增到一個(gè)足以監(jiān)測(cè)到的數(shù)量級(jí)。由于在體內(nèi)達(dá)到一定數(shù)量級(jí)會(huì)造成生物體死亡，這相當(dāng)于是在和動(dòng)物體內(nèi)的病毒賽跑，以達(dá)早發(fā)現(xiàn)，早處理的效果。